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如何捕捉弱荧光下的显微图像

    如何在弱荧光条件下获取显微图像,一直是显微镜厂家和图像采集装置制造者一直在努力探求改善的课题。有越来越多的方法出现来改善这一状况:
    1)首先,应该选取高质量的荧光显微镜,和适用于不同荧光光谱的荧光物镜;
    2)清洗干净的样品载体(如载玻片、盖玻片等),消除不必要的杂荧光干扰;
    3)尽量完善的样品制备;
    4)选取合适的激发光源;
    5)选取高敏感度和大动态范围的CCD,当然也可能是EMCCD之类的;
    在上述条件的基础上,数码摄像头的调整可以适当增加增益,但小心因之而引起的信噪比下降,还可以用过滤的方法尽量消除噪音信号。另外,想要降低数码摄像头的分辨率还可以使用bin,很多使用者在拍摄荧光图像时,也使用很高的分辨率,在通常情况下是得不偿失的。
    6)我们还可以通过增加曝光时间来达到这一目的,当然要注意时间延长对样品的淬灭影响,如果可以,可以用一些抗淬灭剂;
    7)当然降低拍摄环境光线的干扰(背景光)也是非常重要的。

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